特點：
- 在活細(xì)胞中檢測Caspase-3并染色細(xì)胞核DNA
- 直接加入細(xì)胞培液,孵育15-30分鐘后即可檢測，無需清洗殘余染料
- 兼容使用熒光素濾光片的流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡。
- 可固定染色
Principle of NucView Caspase-3 Substrate Detection.
DEVD-NucView 488 Caspase-3 底物是Biotium公司開發(fā)的一系列在活細(xì)胞內(nèi)實時檢測Caspase活性的NucView Caspase 底物中的第一個產(chǎn)品。不同于傳統(tǒng)的caspase酶檢測方法，Biotium 公司發(fā)明了一種創(chuàng)新的熒光底物設(shè)計技術(shù)，將底物的一部分連接到功能性染料上，從而使這些染料失去功能。利用這種方法設(shè)計的熒光底物在酶切之后，染料能被釋放出來恢復(fù)功能并能結(jié)合目標(biāo)分子釋放熒光（圖2）。
對于DEVD-NucView 488 Caspase-3底物，Biotium 將一段帶有大量負(fù)電荷的DEVD肽連接到一種和DNA結(jié)合的染料上。這些負(fù)電荷使得該染料不能結(jié)合DNA，也就不能產(chǎn)生熒光（圖6）。這種底物可以快速的穿過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)并在這里被Caspase-3剪切，從而釋放出和DNA有高親和力的染料。釋放出來的染料可以遷移進(jìn)入細(xì)胞核并把細(xì)胞核染成亮綠色（圖1）。因此，這種雙功能底物讓研究人員在凋亡細(xì)胞內(nèi)檢測Caspase-3活性的同時染色細(xì)胞核，顯示細(xì)胞核在凋亡過程中經(jīng)歷的形態(tài)學(xué)變化。在眾多凋亡的細(xì)胞內(nèi)，不同細(xì)胞可能處在不同時期并經(jīng)歷著凋亡過程中的不同事件，因而研究中很
重要的一點就是能實時獨(dú)立的跟蹤這些事件，從而更好的了解事件之間的相互關(guān)系。DEVD-NucView 488 Caspase-3底物結(jié)合Biotium公司開發(fā)的其他熒光探針，是通過熒光顯微鏡和/或者流式細(xì)胞儀來研究這些不同事件的時間、空間關(guān)系的強(qiáng)有力工具（圖4）。
Biotium公司現(xiàn)提供兩種活細(xì)胞Caspase-3檢測試劑盒。產(chǎn)品＃30029包含DEVD-NucView 488 Caspase-3底物和Caspase-3抑制劑，足夠在流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡上進(jìn)行至少100次實驗。產(chǎn)品＃30030是一種雙凋亡檢測方法試劑盒，包含DEVD-NucView 488 Caspase-3底物和用來檢測磷酸化絲氨酸（PS）轉(zhuǎn)位的紅色熒光sulforhodamine 101-annexin V，足夠在流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡上進(jìn)行至少50次實驗。使用兩種產(chǎn)品的具體實驗步驟可以從Biotium網(wǎng)站上下載。 |
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| 圖4. 在Staurosporine誘導(dǎo)不同凋亡時間（分別為1小時，2.5小時和5小時）后，使用DEVD-NucView 488 Caspase-3底物孵育Jurkat細(xì)胞，并用流式細(xì)胞儀檢測Jurkat細(xì)胞Caspase-3活性。每次分析前，用DEVD-NucView 488 Caspase-3底物（10μM）孵育誘導(dǎo)后的細(xì)胞15分鐘。在0時刻（未用Staurosporine誘導(dǎo)作為對照）Caspase-3陽性細(xì)胞百分比為0％（紅色），1小時為10％（藍(lán)色），2.5小時為80％（紫色），5小時為97％（天藍(lán)色）。 | 圖5. Staurosporine誘導(dǎo)的Hela細(xì)胞在37℃下用1μM的DEVD-NucView 488 Caspase-3底物孵育30分鐘后用通常的3.7%甲醛固定。固定后的細(xì)胞破膜并用sulforhodamine 101-phalloidin（Texas Red-phalloidin）（#00033）染色。調(diào)亡細(xì)胞的細(xì)胞核DNA被酶反應(yīng)釋放的染料染成綠色，同時所有細(xì)胞被F-actin結(jié)合的phalloidin染成紅色。 |
圖6. 用稀釋在pH7.4 TE緩沖溶液中的dsDNA滴定NucView 488 Caspase-3底物（1μM）和它的酶切產(chǎn)物（1μM）。用熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測530nm熒光信號（475nm激發(fā)）。
訂貨信息：
| 編號 | 產(chǎn)品名稱/規(guī)格 | 價格（rmb） |
生產(chǎn)商 |
| 10402 | NucView 488 Caspase-3 Substrate, 1mM in DMSO 100uL |
￥4368 | Biotium Inc. |
| 10403 | NucView 488 Caspase-3 Substrate, 1mM in 1X PBS 100uL |
￥4368 | Biotium Inc. |
| 10405 | NucView 405 Caspase-3 Substrate, 1 mM in DMSO 100uL |
￥4368 | Biotium Inc. |
| 10406 | NucView 530 Caspase-3 Substrate, 1 mM in DMSO 100uL |
￥4368 | Biotium Inc. |
| 10407 | NucView 405 Caspase-3 Substrate, 1 mM in 1X PBS 100uL |
￥4368 | Biotium Inc. |
| 10408 | NucView 530 Caspase-3 Substrate, 1 mM in 1X PBS 100uL |
￥4368 | Biotium Inc. |
| 30029 | NUCVIEW 488 CASPASE 3 ASSAY KIT 1KIT |
￥4774 | Biotium Inc. |
| 30030 | Dual Apoptosis Assay with NucView 488 caspase-3 substrate and Texas Red-Annexin V (50 - 250 assays) 1KIT |
￥4774 | Biotium Inc. |
| 30062 | NucView 488 and MitoView 633 Apoptosis Assay Kit (100 assays) 1KIT |
￥4774 | Biotium Inc. |
| 30067 | Dual Apoptosis Assay with NucView 488 Caspase-3 Substrate and CF594 Annexin V (50 assays) 1KIT |
￥4774 | Biotium Inc. |
| 30072 | NucView 488 and RedDot 2 Apoptosis & Necrosis Kit (100 assays) 1KIT |
￥4186 | Biotium Inc. |
| 30073 | Dual Apoptosis Assay with NucView 488 Caspase-3 Substrate and CF640R-Annexin V (50 assays) 1KIT |
￥4774 | Biotium Inc. |
| 10402-T | NucView 488 Caspase-3 Substrate, 1mM in DMSO 10uL |
￥882 | Biotium Inc. |
| 10403-T | NucView 488 Caspase-3 Substrate, 1mM in 1X PBS, Trial Size 10uL |
￥882 | Biotium Inc. |
| 10405-T | NucView 405 Caspase-3 Substrate, 1 mM in DMSO, Trial Size 10uL |
￥882 | Biotium Inc. |
| 10406-T | NucView 530 Caspase-3 Substrate, 1 mM in DMSO, Trial Size 10uL |
￥882 | Biotium Inc. |
| 10407-T | NucView 405 Caspase-3 Substrate, 1 mM in 1X PBS, Trial Size 10uL |
￥882 | Biotium Inc. |
| 10408-T | NucView 530 Caspase-3 Substrate, 1 mM in 1X PBS, Trial Size 10uL |
￥882 | Biotium Inc. |
| 30029-T | NUCVIEW 488 CASPASE 3 ASSAY KIT, TRIAL SIZE 1ST |
￥1288 | Biotium Inc. |